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[酶] ta不行！NGS文库构建中的明星－Tn5酶
发布时间：
2024-06-28 00:00
Tn5 因其转座机制随机性好、稳定性高、文库构建快等特点，已成为 NGS 文库构建 中备受关注的工具。
Tn5转座酶建库原理
诺唯赞科普「视」务所，带你理清建库原理，get高分文章思路。
2分钟带你从Tn5结构、转座机制捋清如何进行文库构建，一看就明白啦！
Tn5酶技术应用
1. DNA文库构建
与传统的DNA文库构建方法相比，转座酶法DNA建库将繁琐的DNA片段化、末端修复和接头连接反应等步骤简化为一步酶促反应，具有建库时间短、操作简单的特点，是您快速上手NGS建库的不二选择（图1）。
图1. 转座酶DNA建库原理图
2. RNA文库构建
相较于传统的RNA建库方法，转座酶法RNA建库将繁琐的片段化、二链合成、末端修复、dA - Tailing和接头连接等步骤简化为一步酶促反应。不仅显著降低起始模板投入量，还将RNA建库的时间缩短至2 h（图2）。
图2. 转座酶RNA建库原理图
3. ATAC-seq
ATAC-seq是一项用于研究染色质可及性的技术（图3）。该技术利用Tn5酶将DNA序列插入到开放的染色质区域，以检测全基因组范围内的染色质开放程度，并获取蛋白质可能的结合位点，进而筛选感兴趣的调控因子。目前，ATAC-seq广泛应用于核小体定位、早期胚胎发育研究以及肿瘤机制研究等领域。
图3. ATAC-seq原理图
4. CUT&Tag
CUT&Tag是一种研究蛋白质-DNA相互作用的新方法，Protein A/G与包埋了接头的Tn5融合作为CUT&Tag核心酶发挥作用（图4）。Protein A/G-Tn5在抗体引导下靶向目的蛋白，并在目的位点周围进行DNA片段化，加入接头，通过PCR扩增，就可以形成可直接用于高通量测序的文库。CUT&Tag适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤和表观遗传学等领域。
图4. CUT&Tag原理图
5. LIANTI
LIANTI (Linear Amplification via Transposon Insertion) ，是一种经过改良的单细胞全基因组扩增方法（图5）。该方法利用Tn5转座酶与LIANTI序列结合，形成含有T7 promoter的Tn5转座复合体，然后将其与单细胞基因组DNA结合，进行片段化并插入LIANTI转座子。通过体外转录，可以获得大量线性扩增的转录本，经过逆转录得到大量扩增产物，随后进行建库测序操作。
图5[1]. LIANTI原理图
诺唯赞关联产品速递
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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TruePrep DNA Library Prep Kit V2 for Illumina 转座酶法DNA文库构建（Illumina平台） |
TD501/TD502/TD503 |
24/96 rxns |
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TruePrep DNA Library Prep Kit V2 for MGI 转座酶法DNA文库构建（MGI平台） |
TDM501/TDM502/TDM503 |
24/96 rxns |
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TruePrep Flexible DNA Library Prep Kit for Illumina 快速转座酶法DNA文库构建（Illumina平台） |
TD504 |
24/96 rxns |
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TruePrep Flexible DNA Library Prep Kit for MGI 快速转座酶法DNA文库构建（MGI平台） |
TDM504 |
24/96 rxns |
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TruePrep RNA Library Prep Kit for Illumina 转座酶法RNA文库构建（Illumina平台） |
TR501 |
24/96 rxns
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TR502 |
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TR503 |
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Hyperactive Universal CUT&Tag Assay Kit for Illumina Pro CUT&Tag试剂盒 |
TD904 |
12/48 rxns |
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Hyperactive ATAC-Seq Library Prep Kit for Illumina ATAC-seq试剂盒 |
TD711 |
12/48 rxns |
