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干货 | PCR耗材真的是随便买买就能用？别让大意毁了理想结果！

发布时间：

2024-10-09 17:52

PCR耗材广泛应用于有DNA、RNA等分子实验中，包含PCR实验、逆转录实验、荧光定量PCR实验等。

逆转录（reverse transcription, RT）实验是以RNA为模板合成DNA的过程，而RNA作为单链核酸，很容易被降解，所以我们在进行逆转录实验时对实验操作、耗材选择非常谨慎，避免一不小心就影响到实验结果。

实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR, qPCR）是利用荧光信号积累实时监测PCR扩增产物并进行定量解析的方法。其模板质量、聚合酶的扩增效率等因素均会影响荧光定量PCR的实验结果。所以荧光定量实验使用耗材必须对荧光信号的干扰要小，以确保在qPCR步骤中能够准确读取荧光信号。

我们应该如何选择合适的耗材？

✦ PCR单管：通常为0.2 ml，透明，管盖包含平盖和凸盖两种形式。

平盖可为qPCR提供精确的荧光信号传递，同时便于书写标记；凸盖与PCR仪顶部热盖接触，有助减少压力引起的反应管变形，但会影响荧光信号传递，无法应用于qPCR实验。

✦ PCR 8联管：通常包含0.1 ml和0.2 ml，颜色主要为透明和白色，管盖包含非连盖和连盖。

根据不同型号PCR/qPCR仪的加热模块体积（0.1 ml / 0.2 ml）确定耗材体积，避免高度错误对仪器造成破坏和加热不均导致数据失真；

根据仪器特性确定管材颜色，白管更适合用于顶部采集荧光信号的新型荧光定量PCR仪，例如Bio-Rad CFX系列，Roche 480系列等；但若荧光定量PCR仪是底部或侧部光源的，则应选择透明管，比如宏石SLAN-96P；

非连盖8联管的管盖与管体是分开的，易于更换管盖，但需要单独放置和操作，过程中容易出现管盖错配，连盖8联管的管盖与管体是一体的，操作过程中不会出现管盖错配，但需要独立处理每个管。

✦ 96孔PCR板：分为0.1 ml和0.2 ml，透明板和白板，无裙边、半裙边和全裙边。

耗材体积和颜色的确定与8联管一致；不同品牌型号的荧光定量PCR仪有不同的加热模块，需适配不同裙边的PCR板。其中，无裙边适配性最广，其次是半裙边，然后是全裙边。

96孔板裙边类型	优缺点	适配机型
无裙边	适配性广，可与绝大部分PCR仪和qPCR仪适配；加样过程中，不能提供很好的稳定性	ABl StepOnePlus系列、QuantStudio系列； Bio-Rad CFX系列； Roche Lightcycler系列等
半裙边	加样过程中能提供足够的支撑；可与主流PCR仪和qPCR仪的模块适配，存在部分仪器不适配	ABl StepOnePlus系列、QuantStudio系列； Bio-Rad CFX系列； Roche Lightcycler系列等
全裙边	机械强度高，稳定性好；不方便观察加样；仅适用于具有突出加热模块的仪器	Bio-rad CFX96等

选择PCR耗材时，我们应该关注什么？

➤ 质量优先：应选择高质量聚丙烯（PP）材质且经过严格质量质控，以确保实验结果准确性和一致性。

➤高热密封：应具有良好的密封性，以防止RNA相关样本的降解，且减少反应体系的蒸发和避免交叉污染。

➤高热稳定：应具有良好的热稳定性，以承受实验过程中的高温条件，且不释放其他影响实验的物质。

➤洁净耗材：应选择无菌/无酶的耗材，针对涉及RNA等敏感样本的生物分子实验，确保无外源物质以避免RNA模板的污染。

图1. 可能产生的异常结果（C_T滞后）

产品琳琅满目，有选择困难症，怎么办？

诺唯赞生物耗材选择进口聚丙烯PP材质，产品无菌、无DNA/RNA酶、无热源；管壁均匀薄透，提供更佳的热传导，促使样品更好地实现扩增；多种品类，灵活选择，适配不同应用场景。

➹ 逆转录推荐耗材：PCR单管(PCR00102)
卡扣易密封，高透好定量

➹ 逆转录/qPCR推荐耗材： PCR 8联管
(PCR00801/02) (PCR00811/12)

双重标记，可靠数据

➹ qPCR推荐耗材：96孔PCR板
(PCR09601SS/02SS) (PCR09611/12)

孔板可拆卸，定量更便捷

➹ qPCR推荐耗材：封板膜
(PCR09600PF/PCR09600SF)
封膜高透光，定量更放心

系列	产品名称	产品货号	包装规格	产品描述
PCR单管	0.2 ml PCR Tubes 0.2 ml PCR单管	PCR00102	1000支/盒	连盖，光学平盖适用0.2 ml热循环模块
8联管	0.1 ml 8-Tube PCR Strips (with Caps) 0.1 ml PCR 8联管，含平盖，透明	PCR00801	125条/盒	非连盖管，透明管适用0.1 ml热循环模块
	0.2 ml 8-Tube PCR Strips (with Caps) 0.2 ml PCR 8联管，含平盖，透明	PCR00802	125条/盒	非连盖管，透明管适用0.2 ml热循环模块
	0.1 ml White 8-Tube PCR Strips (with Caps) 0.1 ml 白色PCR 8联管，含平盖	PCR00811-01	125条/盒	非连盖管，白管适用0.1 ml热循环模块
	0.2 ml White 8-Tube PCR Strips (with Caps) 0.2 ml 白色PCR 8联管，含平盖	PCR00812-01	125条/盒	非连盖管，白管适用0.2 ml热循环模块
	0.2 ml 8-Tube PCR Strips with Attached Caps 0.2 ml 连盖PCR 8联管，透明	PCR00822-01	120条/盒	连盖管，透明管适用0.2 ml热循环模块
	0.1 ml 8-Tube PCR Strips (with Caps) 0.1 ml PCR 8联管，含平盖，透明	PCR00831-01	125条/盒	非连盖管，透明管适用0.1 ml热循环模块
	0.2 ml 8-Tube PCR Strips (with Caps) 0.2 ml PCR 8联管，含平盖，透明	PCR00832-01	125条/盒	非连盖管，透明管适用0.2 ml热循环模块
96孔PCR板	0.1 ml Semi-Skirted 96-Well PCR Plates 0.1 ml半裙边96孔PCR板	PCR09601SS	20块/盒	可拆，半裙边，透明板适用0.1 ml热循环模块
	0.2 ml Semi-Skirted 96-Well PCR Plates 0.2 ml半裙边96孔PCR板	PCR09602SS	20块/盒	可拆，半裙边，透明板适用0.2 ml热循环模块
	0.1 ml White Semi-Skirted 96-Well PCR Plates 0.1 ml白色半裙边96孔PCR板	PCR09611-01	20块/盒	可拆，半裙边，白板适用0.1 ml热循环模块
	0.2 ml White Semi-Skirted 96-Well PCR Plates 0.2 ml白色半裙边96孔PCR板	PCR09612-01	20块/盒	可拆，半裙边，白板适用0.2 ml热循环模块
	0.1 ml Non-Skirted 96-Well PCR Plates 0.1 ml无裙边96孔PCR板	PCR09621-01	20块/盒	不可拆，无裙边，透明板适用0.1 ml热循环模块
	0.2 ml Non-Skirted 96-Well PCR Plates 0.2 ml无裙边96孔PCR板	PCR09622-01	20块/盒	不可拆，无裙边，透明板适用0.2 ml热循环模块
	0.2 ml White Non-Skirted 96-Well PCR Plates 0.2 ml白色无裙边96孔PCR板	PCR09632-01	20块/盒	不可拆，无裙边，白板适用0.2 ml热循环模块
	0.2 ml Skirted 96-Well PCR Plates 0.2 ml全裙边96孔PCR板	PCR09642-01	20块/盒	不可拆，全裙边，透明板兼容0.1 ml热循环模块
封板膜	Pressure-Activated Plate Sealing Films 压敏型封板膜	PCR09600PF	100片/盒	初始无黏性适用96孔板和384孔板
封板膜	Self-Adhesive Plate Sealing Films 自粘型封板膜	PCR09600SF	100片/盒	初始有黏性适用96孔板和384孔板