Ribo-off Globin & rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)
珠蛋白(Globin) mRNA及rRNA去除试剂盒
血液样本总RNA中去除珠蛋白(Globin)mRNA及rRNA；mRNA和非编码RNA分析
· 低质量RNA样本高效去除效率
· 起始量低至 10 ng
Ribo-off Globin & rRNA Depletion Kit(Human/Mouse/Rat)是针对血液样本总RNA中去除珠蛋白(Globin)mRNA及rRNA的试剂盒。本试剂盒适用于起始模板量为0.01 - 1 μg的血液总RNA，总RNA样本经过Globin mRNA和rRNA与探针杂交、RNase H消化、DNase I消化等步骤，将Globin mRNA及rRNA(包括细胞质rRNA和线粒体rRNA)从总RNA中去除，保留其它mRNA以及非编码RNA，可用于LncRNA等非编码RNA的分析；本试剂盒可兼容部分降解的RNA样本，所得到的产物适用于RNA文库构建及其它实验。
1. 不同物种、不同起始量模板
以Human、Mouse 以及 Rat Blood RNA 为起始模板，分别进行不去除和使用 N408、N*公司（#E7***L）、K*公司（K***78）同类产品进行 rRNA 去除，随后均使用 VAHTS Universal V8 RNA-seq Library Prep Kit for Illumina(NR605)进行链特异性转录组文库构建。经测序分析rRNA与Globin mRNA在下机数据中的占比。评判指标：rRNA ratio≤5%+1%；Globin mRNA ratio ≤1%+0.5%。
不同起始量（Human）
不同物种（100 ng）
图1. 不同起始量、不同物种Globin mRNA及rRNA去除情况
结果表明：不同起始量（1 µg-10 ng）、不同物种的样本，N408均能高效去除目标 RNA。
2. 不同RIN值模板
以100 ng不同RIN值的Human Blood RNA为起始模板，分别进行不去除和使用N408、N*公司（#E7***L）、K*公司（K***78）和 Q*公司(3***80)同类产品进行 rRNA 去除，随后均使用 VAHTS Universal V8 RNA-seq Library Prep Kit for Illumina(Vazyme #NR605)进行链特异性转录组文库构建。经测序分析rRNA与Globin mRNA在下机数据中的占比。
图2. 不同RIN值样本Globin mRNA及rRNA去除情况
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
1. 纯化产物可以如何保存？
答：纯化产物由于浓度较低容易降解，去除Globin mRNA 和rRNA的样品应尽快进行下游实验，否则 于-80 ~ -65 ℃保存。
2. 如果纯化产物用于文库构建，但是使用的是Nuclease-free ddH2O洗脱，如何操作?
答：使用VAHTS Universal V8 RNA-seq Library Prep Kit for Illunima (Vazyme #NR605)时，若条件允许，加入等体积的VAHTS 2 × Frag/Prime Buffer (Vazyme #N402 )，之后反应体系均放大，直至做到纯化步骤，恢复体系；也可以再次使用VAHTS RNA Clean Beads (Vazyme #N412)进行纯化，最后用Frag/Prime Buffer洗脱。
3. 如果起始文库浓度过低，可以从哪些角度去寻找原因并如何改进?
答：Globin mRNA & rRNA去除后RNA的产量取决于起始RNA的质量、样品中rRNA的含量和使用的纯化方法。以高质量的RNA样品为模板构建得到的文库浓度均能达到上机测序要求，如果无法提取合格的RNA样品，可以尝试使用以下方法弥补：①起始量：提高样品起始量，上限1 μg；②做几个重复的样品，到纯化步骤后合并在一起；③做不分选方案：94℃ 8 min打断条件下RNA片段虽然偏小，但是分布会集中，均一性也较好。
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