Hyperactive Universal CUT&Tag Assay Kit for Illumina
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CUT&Tag实验操作指南（TD903） |
CUT&Tag实验注意事项（TD903） |
蛋白质-DNA互作
· 操作简便：全流程优化，磁珠提取安全高效
· 样本投入量低：技术革新，适用微量样本
· 抗体兼容性好：转座子升级，抗体亲和力高
· 测序质量高：扩增模块优化，数据真实可靠
· 信噪比高：背景远低于ChIP-Seq，重复性好
样本投入量低，信噪比高
针对不同起始量的K562 细胞（100、10,000 cells），使用TD903 进行H3K27me3 抗体的CUT&Tag实验，通过Agilent 2100 Bioanalyzer进行文库分布检测。结果显示对于不同细胞投入量（100、10,000 cells），均可构建出相似的ladder 状的文库，说明TD903 能够兼容低细胞起始量的实验。
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针对不同起始量的K562 细胞（100、1,000、10,000、100,000 cells），使用TD903 进行H3K4me3 抗体的CUT&Tag 实验。结果显示不同投入量染色体图谱基本一致，100 个细胞即可提供与ChIP-Seq 结果一致的覆盖图谱。
适用性广
使用TD903 针对10,000个A549 细胞、Hela细胞和K562 细胞，进行H3K4me3 抗体的CUT&Tag 实验。结果显示TD903 适用于多种细胞系的DNA-蛋白质互作研究。
投入10,000 个K562 细胞，使用TD903 分别测试以下不同抗体：H3K4me3 (abcam#ab8580)、H3K27me3 (CST#9733S)、H3K27ac (abcam#ab4729)、RNA PoI II (abcam#ab26721) 、CTCF (CST#3418S)。结果显示TD903 适用于多种靶蛋白的DNA-蛋白质互作研究。
Hyperactive Universal CUT&Tag Assay Kit for Illumina是针对Illumina高通量测序平台定向开发的用于研究蛋白质-DNA相互作用的试剂盒。CUT&Tag（Cleavage Under Targets & Tagmentation）技术是一种研究蛋白质-DNA相互作用的新方法，使用Protein A/G融合的转座酶，在抗体引导下精准靶向目的蛋白，并在目的位点附近进行DNA的片段化。
本试剂盒优化了实验反应体系和建库流程，与传统的ChIP-Seq相比，具有细胞投入量低、实验周期短、信噪比高、可重复性好等优势，尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。试剂盒中所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，较大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
BOX 1：ConA Beads和DNA Extract Beads 2 ~ 8℃保存，其余组分室温(15 ~ 25℃)保存，根据不同目的地调整运输方式。
BOX 2：5% Digitonin -30 ~ -15℃保存，室温(15 ~ 25℃)下可保存1周；
其余组分-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
常见问题与解决方案
Q1: CUT&Tag适用于什么物种?
CUT&Tag广泛适用于常规哺乳动物细胞的蛋白质-DNA互作研究，植物等细胞可以经过特殊的处理(破除细胞壁或者提取细胞核)来进行实验，操作可以参考CUT&RUN技术的前端处理方式。
Q2: ConA Beads主要作用是什么?
ConA Beads经过刀豆蛋白A包被，能与细胞膜/核膜上的糖蛋白结合，从而吸附细胞，使细胞处理操作可视化，同时减少在后续实验过程中细胞的损失。
Q3: CUT&Tag是不是只能用Illumina平台测序?
Vazyme #TD903提供的转座子是针对Illumina平台定向设计的，如果需要使用其他测序平台，需自行更换适配相应平台的扩增引物。
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