去除人、小鼠和大鼠总RNA中的rRNA；mRNA和非编码RNA分析
· 快速：操作简便，全流程只需1 h
· 兼容：兼容不同物种——人、小鼠、大鼠；兼容低起始量样本——低至10 ng；兼容低质量样本——如FFPE样本
· 高效：rRNA去除效率高，rRNA残留率<10%
Ribo-MagOff rRNA Depletion Kit（Human/Mouse/Rat）适用于去除人、小鼠和大鼠总RNA中的rRNA（
1. 不同物种兼容性测试
以293 total RNA、Mouse total RNA、Rat total RNA为起始模板，投入量为100 ng，分别进行不去除和使用Vazyme #N420、Vazyme #N406进行rRNA去除。随后均使用VAHTS Universal V8 RNA-seq Library Prep Kit for Illumina(Vazyme #NR605)进行转录组文库构建，并对高质量的Clean Reads进行分析。
（1）rRNA残留率
（2）基因检出
结果显示：针对不同物种，Vazyme #N420的兼容性高，rRNA残留率低于10%，具有丰富的基因检出数。
2. 不同起始量兼容性测试
以293 total RNA为起始模板，投入量分别为1 μg、100 ng、10 ng。分别进行不去除和使用Vazyme #N420、Vazyme #N406进行rRNA去除。随后均使用VAHTS Universal V8 RNA-seq Library Prep Kit for Illumina(Vazyme #NR605)进行转录组文库构建，并对高质量的Clean Reads进行分析。
（1）rRNA残留率
（2）基因检出
结果显示：针对不同起始量样本，Vazyme #N420的兼容性高，rRNA残留率均低于5%，具有丰富的基因检出数。
3. FFPE样本兼容性测试
以FFPE标准品为起始模板，投入量为200 ng，分别进行不去除和使用Vazyme #N420、Vazyme #N406进行rRNA去除。随后均使用VAHTS Universal V8 RNA-seq Library Prep Kit for Illumina(Vazyme #NR605)进行转录组文库构建，并对高质量的Clean Reads进行分析。
（1）rRNA残留率
（2）基因检出
结果显示：针对FFPE样本，Vazyme #N420的兼容性高，具有丰富的基因检出数。
BOX 1，-30~-15℃保存，0℃运输；
BOX 2，2~8℃保存，根据不同目的地调整运输方式。
纯化产物可以如何保存？
纯化产物由于浓度较低容易降解，去除rRNA的样品应尽快进行下游实验， 否则于-80 ~ -65℃保存。
如果纯化产物用于文库构建，但是使用的是Nuclease-free ddH2O洗脱，如何操作?
若条件允许，加入等体积的 VAHTS 2 × Frag/Prime Buffer(Vazyme #N402)，之后反应 体系均放大，直至做到纯化步骤，恢复体系；也可以再次使用VAHTS RNA Clean Beads (Vazyme #N412)进行纯化，最后用1 × Frag/Prime Buffer 洗脱。
如果起始文库浓度过低，可以从哪些角度去寻找原因并如何改进？
rRNA去除后RNA的产量取决于起始RNA的质量，样品中rRNA的含量和使用的纯化方法。 以高质量的RNA样品为模板构建得到的文库浓度均能达到上机测序要求，如果无法提取 合格的RNA样品，可以尝试使用以下方法弥补：
① 起始量：提高样品起始量，上限1 μg；
② 做几个重复的样品，到纯化步骤后合并在一起；
③ 做不分选方案：94℃ 8 min打断条件下RNA片段虽然偏小，但是分布会集中，均一性也较好。
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