EpiArt Magnetic DNA Methylation Bisulfite Kit
省时高效便捷的磁珠法甲基化转化，100 min转化率高于99.5%！
DNA甲基化转化
转化效率高：未甲基化的胞嘧啶转化率≥99.5%。
转化速度快：转化时间缩短至100 min。
投入量兼容范围广：可兼容投入量范围为100 pg - 2 μg的DNA。
操作简便：可与高通量自动化仪器配套使用。
DNA甲基化与基因表达密切相关，在基因印迹、胚胎发育、染色体基因沉默和细胞周期调控等生理和病理过程中发挥着重要作用。EpiArt Magnetic DNA Methylation Bisulfite Kit是一款磁珠法亚硫酸氢盐转化试剂盒，可用于DNA甲基化研究。本试剂盒的DNA投入量范围为100 pg - 2 μg，未甲基化胞嘧啶转化效率≥99.5%。本试剂盒将DNA变性和亚硫酸氢盐转化过程集成为一步，同时缩短转化反应时间至100 min，通过反应产物与磁珠的结合，进行脱磺化和纯化步骤。转化后的产物适用于PCR扩增、qPCR检测和NGS建库测序等下游应用。本试剂盒可与高通量自动化仪器配套使用。
1.良好的样本投入量兼容性
以293细胞 gDNA为模板，掺入1% Unmethylated Lambda DNA，起始量分别为100 pg、1 ng、10 ng、200 ng、1 μg和2 μg。在不同投入量下，Vazyme #EM103转化率均>99.5%，优于Supplier A、Supplier B。
2.良好的样本类型兼容性
分别以1 ng人cfDNA、1 ng人全血 gDNA、200 ng小鼠 FFPE样本、200 ng拟南芥 gDNA、200 ng噬盐古菌 gDNA为模板，掺入1% Unmethylated Lambda DNA。Vazyme #EM103对不同类型DNA样本的转化率均>99.5%，优于Supplier A，优于或与Supplier B接近。
3.更高的转化产物回收率
以293细胞 gDNA、人全血gDNA为模板，起始量分别为200 ng、1 μg和2 μg，对转化产物进行单链DNA定量，Vazyme #EM103的转化回收率均高于Supplier A、Supplier B。
15 ~ 25℃保存，室温运输。
溶解后的CT Conversion Mix试剂需要避光保存。CT Conversion Mix推荐现用现配，若无法一次性全部使用，可于室温(15 ~ 25℃)保存24 h，0 ~ 4℃保存1周或者冷冻(-30 ~ -15℃)保存1个月。
Q1. Input DNA的要求？
Nuclease-free ddH2O或者TE Buffer溶解的DNA均可适用；可兼容动物、植物、微生物的细胞或组织提取的DNA；cfDNA。投入范围为100 pg - 2 μg，体积为20 μl；A260/A280比值在1.6 - 2.0之间。
Q2. 样本投入体积可以超过20 μl吗？
可以，样本投入体积可达40 μl。可参考如下模板体积加量方案：
配制CT Conversion Mix 时根据投入的模板体积，减少添加Nuclease-free ddH2O的体积，其余2组分正常添加。如：20 μL模板对应添加900 μL的Nuclease-free ddH2O，30 μL对应添加800 μL的Nuclease-free ddH2O，40 μL对应添加700 μL的Nuclease-free ddH2O，以此类推。减少Nuclease-free ddH2O的体积配制CT Conversion Mix 时可能存在粉末无法完全溶解的情况，可以剪去枪头顶部，吹打混匀后吸取悬浊液进行转化反应。
Q3. 是否可以增加磁珠体积提高回收率？
适当增加磁珠体积，可以提高DNA的回收率，建议磁珠体积添加不要超过15 μl；该操作可能会导致洗脱保留上清时吸取到磁珠，需小心操作。若吸取上清时吸到磁珠，将含有磁珠的洗脱液置于磁力架上，再次取上清即可。
Q4. DNA回收率较低可能的原因和解决方案？
（1）对转化产物的定量方式选择错误：转化产物以单链形式存在，应使用ssDNA定量方式。
（2）Input DNA有杂质：确保DNA的A260/A280比值在1.6 - 2.0；
（3）E-Wash Buffer醇含量不足：请加入指定体积的无水乙醇，勿长时间开盖放置；
（4）E-Desulphonation Buffer有机溶剂含量不足：请勿长时间开盖放置；
（5）脱硫反应时间过长，超过25 min：严格控制脱硫反应步骤时间，不要超过25 min。
Q5. DNA转化率低可能的原因和解决方案？
（1）没有充分溶解CT粉末或CT Conversion Mix失效：按说明书提示正确溶解和保存CT Conversion Mix，并在其有效期内使用；
（2）反应温度或时间设置错误：请按照说明书正确设置反应温度与时间；
（3）Input DNA样本GC含量过高或投入量不在推荐范围：可延长转化时间，将64℃ 90 min延长至64℃ 2.5 h。
Q6. EM103转化后产物的长度有多大？
gDNA经EM103转化后，转化产物呈弥散分布，条带大小在200 - 1,000 bp。
图1: 293 gDNA 经EM103转化后产物胶图
相关产品
Equalbit 1 × dsDNA HS Assay Kit
EQ121-01/02
EM201-01
VAHTS Multiplex Oligos Set 4/5 for Illumina
N321/N322-01
VAHTS Dual UMI UDI Adapters Set 1 – Set 4 for Illumina
N351/N352/N353/N354
