Recombinant Enterokinase/Recombinant Enterokinase（Tag-free）
重组肠激酶
- 用于切除重组蛋白N端融合标签
- 用于活化胰蛋白酶原
- 生物制药领域常用于重组蛋白、多肽类药物的生产制备，例如GLP-1及其类似物等
肠激酶（Enterokinase，EK）是一种高度特异性的丝氨酸蛋白酶，可以专一识别DDDDK序列并在赖氨酸残基的C端进行切割。本品为重组牛源肠激酶轻链片段，可以在较宽的pH范围（4.5-9.5）和温度范围（4-45℃）内进行有效切割。Vazyme提供有His-tag和无His-tag两种肠激酶，客户可结合应用场景和纯化去除工艺进行选择。
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产品名称 |
Recombinant Enterokinase/Recombinant Enterokinase（Tag-free） |
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来源 |
牛源 |
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表达宿主 |
重组E.coli |
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性状 |
透明的，无色或淡黄色液体 |
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活性 |
15~30 U/µl |
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纯度（HPLC） |
≥95% |
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分子量 |
25.8±2.6kDa |
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活性单位定义 |
在 25℃，12h-16h 之内，将 0.5mg 保存于 25mM Tris-HCl（pH8.0）缓冲液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量，定义为 1U。 |
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储存条件 |
-30 ~ -15℃ |
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有效期 |
2年 |
1. 质量高：纯度高，特异性好；
2. GMP级：生产过程符合GMP要求，可提供完整的质量文件；
3. 无动物源性：重组生产，生产过程不使用任何动物源原料，无外源性病毒污染；
4. 供应稳定：质量和批量稳定，可保障稳定供应；
5. 标签选择：提供有His-tag和无His-tag两种肠激酶，客户可结合应用场景和纯化去除工艺进行选择；
6. 规格定制：规格可根据客户需求定制。
| 组分 | RM1011-00 | RM1011-01 | RM1011-02 | RM1011-03 |
| Recombinant Enterokinase | 100 U | 1000 U | 10 KU | 100 WU |
| 组分 | RM1012-00 | RM1012-01 | RM1012-02 | RM1012-03 |
| Recombinant Enterokinase（Tag-free） | 100 U | 1000 U | 10 KU | 100 WU |
储存稳定性：保存在-20℃以下，2年内稳定；
运输稳定性：干冰保温运输，运输过程不融化，活性稳定。
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1、有哪些常见影响肠激酶发挥活性的因素？ 如何解决？
在＞200mM咪唑，或＞200mM NaCl，或＞5%甘油条件下，酶切效果受影响，可将样品进行稀释或者透析，再进行酶切。如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。磷酸盐对Enterokinase发挥活性有影响，因此尽量避免酶切体系内磷酸盐的存在。
2、融合蛋白的使用量？及酶切温度和酶切时间？
重组 EK：200-2000U 可酶切融合蛋白：0.1-1g/L （1L）
反应时间：25℃反应过夜或者 24h，用 SDS-PAGE 或者 HPLC 检测酶切效果。
4℃反应酶切，需要将酶切时间延长至 48-64h，或增加 2-3 倍酶量。
3、使用pH和缓冲液体系是什么？
25mM Tris-HCl，pH 8.0@25℃。
4、如何在纯化过程中去除rEK酶？
本司生产的肠激酶比活高，使用过程中加量较少，可不考虑其除去。如果确实需要去除rEK，建议的去除方法如下：
a. 使用亲和层析，可以利用苯甲脒亲和填料纯化去除，由于肠激酶是一种丝氨酸蛋白酶，可以在纯化时与苯甲脒填料结合，从而达到纯化目的。
b. 使用离子交换填料，pH8.0条件下，肠激酶与DEAE填料结合，并且在0.15M NaCl中可以被洗脱。可以利用目的蛋白与肠激酶电荷以及与DEAE胶的结合以及洗脱的不同条件将二者进行分离。
c. 我们同时提供有His-tag和无His-tag两种肠激酶，可分别使用Ni柱亲和层析吸附和穿透去除。
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