2 × Rapid Taq Plus Master Mix (Dye Plus)
价格
¥ 290
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货号 :
P223-01/02/03/04
-
规格
- 5 × 1 ml
- 15 × 1 ml
- 50 × 1 ml
- 10 × 5 ml
*具体价格咨询当地业务员
2 × Rapid Taq Plus Master Mix (Dye Plus)
快速高成功率Taq酶预混液（蓝色）
1 sec/kb快速扩增，基因鉴定【快】搞定！
快速PCR；基因型鉴定；菌落PCR；
本产品是新一代快速扩增热启动Taq DNA聚合酶，结合了高封闭率的双物种抗体，配以优化的缓冲体系，在1 - 10 sec/kb的扩增速度下展现出优异的成功率和特异性，2 kb以内的片段扩增速度可达1 sec/kb。仅需加入引物和模板即可进行扩增，减少了移液操作，提高了检测通量和结果的重现性。试剂具有优异的扩增性能和高保存稳定性，适用于15 kb以内基因组、质粒模板及10 kb以内cDNA模板的扩增。此外，本产品中含有蓝色Loading Buffer，PCR反应结束后可直接进行电泳，使用便捷。
快速扩增：1-10 sec/kb (<2 kb，1 sec/kb；<5 kb，5 sec/kb；≤15 kb，10 sec/kb）
高成功率：兼容动植物裂解产物、细菌等粗品模板，高/低GC体系（24%-79%GC）、长片段体系（15 kb以内基因组/质粒，10 kb以内cDNA）、10 kb以内的7重扩增
特异性好：高封闭率的抗体修饰，具有热启动活性，扩增特异性更好
操作便捷：试剂-20℃保存不结冰，随取随用；加入引物和模板即可进行扩增，产物可直接进行电泳
快速扩增
使用Vazyme #P223、Vazyme #P222和Vazyme #P213，按照各自说明书推荐反应程序扩增5 kb片段，P223仅需1.2 h即可完成扩增，所需扩增时间更短。
2 kb以内片段（包含基因组DNA或粗品模板）扩增的延伸效率可达1 sec/kb。
5 kb以内片段（包含基因组DNA或粗品模板）扩增的延伸效率可达5 sec/kb。
15 kb以内基因组DNA及10 kb以内粗品模板扩增的延伸效率可达10 sec/kb。
高成功率
1、GC兼容范围广
使用Vazyme #P223及市售其他Taq酶（Supplier A~E），测试高/低GC体系的兼容性。结果显示：P223可兼容GC含量范围在24%-79%的体系，P223扩增成功率、特异性均优于Supplier A~E。
2、模板兼容范围广
使用Vazyme #P223及市售其他Taq酶（Supplier A~E），按各自说明书建议的延伸速度测试不同模板类型兼容性。结果显示：P223可兼容动植物裂解产物、菌斑/菌液；P223扩增成功率、特异性、产量均优于Supplier A~E。
3、兼容10 kb以内片段的多重扩增（7重扩增）
使用Vazyme #P223，以15 sec/kb的延伸速度扩增人基因组DNA模板，结果显示：P223可兼容10 kb以内片段的7重扩增。
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输
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Q1：P223可兼容的模板类型？
A1：常规模板（gDNA≤15 kb、cDNA≤10 kb、质粒≤15 kb），高GC/高AT模板（GC含量整体24%-79%）、动植物裂解产物、菌液/菌斑等。
注：以酵母菌斑/菌液为模板扩增长片段体系时，可能存在难扩增的情况，针对这类体系可适当延长P223的扩增速度（5-10 sec/kb），或对酵母菌斑/菌液进行粗裂解后再进行扩增。
Q2：扩增效率低，实验组无扩增条带？
A2：(1) 引物
检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解；引物设计是否合理，可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
(2) 模板
长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；模板为粗品，存在抑制物，建议降低模板浓度；若模板为cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。
(3) 酶
反应所用的酶失活，建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。
(4) 扩增体系
反应体系配制错误，建议重复实验。
(5) 反应程序
检查变性温度是否准确，PCR仪指示温度与实际温度是否相符，如果温度过高，酶在前几个循环就迅速失活，温度过低则模板变性不彻底；退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，摸索合适的退火温度；检查延伸时间是否充足。
Q3：扩增的条带亮度不太亮，产量低？
A3：(1) 引物
检查人工合成的引物是否降解。
(2) 模板
首先确认模板的质量，长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；如果模板没有了，可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增。
(3) 反应程序
可梯度摸索适宜退火温度；延长延伸时间，提高循环数。
Q4：扩增特异性差，出现非特异性扩增？
A4：(1) 引物
引物设计不够优化。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体，可降低引物浓度进行优化，必要时重新设计引物。
(2) 模板
模板不纯，被污染，需重新制备模板。
模板降解或过量，通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新纯化模板。模板的使用量请参考说明书。
(3) 反应程序
反应程序不够优化。如果出现比目的条带小的杂带，可通过提高退火温度，降低循环数调整；如果出现比目的条带大的杂带，可缩短延伸时间、降低循环数。
Q5：扩增产物跑胶条带弥散或拖尾？
A5：(1) 胶
制胶时要使胶完全融化。
(2) 引物
检查引物是否降解。
(3) 模板
模板降解或过量，可通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新制备模板。模板的使用量请参考说明书。如果目的条带较长，模板是cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度，逆转录时不加随机引物重新逆转录。
(4) 反应程序
反应程序不够优化。退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，摸索合适的退火温度。
Q6：空白对照出现扩增产物？
A6：(1) 引物设计不合理
扩增序列与非目的扩增序列有同源性，PCR也可以扩增出非靶序列的序列。
(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致，说明有污染
更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。
(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染，操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染，可用巢式PCR方法减轻或消除污染。
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