miRNA Unimodal SYBR qPCR Master Mix
价格
¥ 350
请询价
货号 :
MQ102-01/MQ102-02
-
规格
- 125 rxns
- 500 rxns
*具体价格咨询当地业务员
miRNA Unimodal SYBR qPCR Master Mix
高特异的miRNA染料法qPCR Mix
引物能送皆送，定量准上加准
miRNA基因表达分析
本产品是使用SYBR Green I嵌合荧光法对miRNA进行定量反应的专用预混液，颜色为蓝色，便于加样。其核心酶是一种经过BioSmart平台定向筛选的酶，它与高封闭率双物种抗体结合，形成热启动Taq酶，在55℃下能够保持严格的封闭性，配以针对qPCR优化的Buffer，非常适合进行高特异性、高灵敏度的miRNA定量反应。本产品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye，适应于多种qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX的浓度。此外，本产品提供了人、大鼠、小鼠通用的 U6 内参上下游引物，可在宽广的定量范围内得到良好的标准曲线。
推荐与本公司miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit(by stem-loop)(Vazyme #MR101)或miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by tailing A)(Vazyme #MR201)配套使用。
1. 高效实验：附赠U6内参上下游引物，配备茎环通用下游引物及相关设计软件
2. 高灵敏度：可在pg级的总RNA中检测目的miRNA
3. 强特异性：区分单碱基的差异，非特异识别率低于5%
1. 高效实验
Vazyme #MQ102配备了miRNA茎环引物设计软件和配套下游通用茎环引物，同时附赠人、大鼠、小鼠通用的 U6 内参上下游引物，可在宽广的定量范围内得到良好的标准曲线。
市面miRNA定量试剂组分区别
|
传统miRNA定量试剂 |
Vazyme #MQ101 |
Vazyme #MQ102 |
|
qPCR Mix |
qPCR Mix |
qPCR Mix |
|
ROX 1 |
通用茎环下游引物 |
通用茎环下游引物 |
|
ROX 2 |
|
U6上游引物 |
|
|
|
U6下游引物 |
2. 高灵敏度
以293T细胞RNA为模板稀释6个梯度（1pg-100 ng），用miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101)进行反转录，获得的cDNA用Vazyme #MQ102检测hsa-miR-21-5p基因表达情况。结果显示，Vazyme #MQ102可在pg级的总RNA中检测目的miRNA，且能在宽广的定量范围内得到良好的标准曲线。
图1 Vazyme #MQ102测试模版稀释6个梯度（1 pg-100 ng）后的检测情况
3. 强特异性
microRNA 序列短，同一家族不同成员序列非常相似，有些仅有单个碱基差别，因此特异性对 microRNA 定量至关重要。Vazyme #MQ102核心酶以双抗封闭，配以优化的Buffer，能够区分单碱基的差异，非特异识别率低于5%，实现高特异性定量。
图2 Vazyme #MQ102测试同一家族不同成员间单个碱基的差异
-30~-15℃避光保存，≤0℃运输。Master Mix解冻后可于2~ 8℃避光条件下稳定存放6个月。
Q1、采用其他软件设计的茎环逆转录引物及定量引物，能否使用Vazyme #试剂盒（MR101+MQ102）？
A1：可以的。逆转录时可参照说明书直接投入其他软件设计的茎环逆转录引物（2μM浓度），且后续定量实验直接投入相应的定量上下游引物即可。注：若其他软件默认的茎环引物与Vazyme miRNA 引物软件默认的相同，后续搭配MQ102无需合成反向引物，可以使用MQ102自带的mQ Primer R；若茎环引物序列不同，则不能使用MQ102提供的mQ Primer R，需合成正反向引物。
Q2、内参是否需要设计茎环引物及逆转录和定量的引物如何使用？
A2：若选择U6等较长的基因作为内参基因，由于序列相对较长，无需设计茎环逆转录引物，直接使用常用的Primer Premier 5等软件设计即可，逆转录时投入内参下游引物（2μM浓度），且后续定量实验直接投入内参的上下游引物即可。如果选择长度较短的miRNA作为内参，需要设计茎环引物进行逆转录，推荐使用Vazyme miRNA 引物设计软件设计逆转录引物和qPCR引物。
Q3、如果要研究多个miRNA定量实验，是不是每个miRNA均要单独设计一条茎环引物进行逆转录？
A3：是的，针对每个miRNA都要设计一条特异的茎环逆转录引物，一管反应中只能逆转一个miRNA（内参也是一样）。
Q4：在逆转录时，多个茎环逆转录引物/内参引物是否可以在同一管中进行？
A4：不推荐。在一管中同时投入多个茎环逆转录引物同时进行多个miRNA逆转录时，不同特异性茎环引物茎环结构之间会相互干扰和影响。
Q5：逆转录体系应该投入多少RNA？
A5：如果提取的是Total RNA，MR101可以兼容10 pg-1 μg的RNA投入量，但是不同miRNA表达丰度不同，建议尽量投入0.5-1 μg RNA。如果提取的是miRNA，逆转投入量参考1/10-1/5 total RNA的量，具体还是要根据目标miRNA的丰度来调整。
Q6、miRNA为什么要合成茎环引物？
A6：因为miRNA较短，如果使用普通逆转录和定量方法，无法设计定量引物，需要在逆转录阶段将cDNA延长。
Q7：要分别做miRNA 和总RNA，可以先提出来总RNA，再分别逆转总RNA 和miRNA 吗
A7：可以，提出总的RNA 分两份，一份做普通逆转录，一份做miRNA 逆转录（颈环法或者加尾法）。
相关产品
