Mut Express Universal Fast Mutagenesis Kit
价格
¥ 1410
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货号 :
C216-01/02
-
规格
- 10 rxns
- 20 rxns
*具体价格咨询当地业务员
Mut Express Universal Fast Mutagenesis Kit
快速高成功率定点突变试剂盒
1-5个质粒位点突变（删除、插入和替换）
Mut Express Universal Fast Mutagenesis Kit是基于ClonExpress同源重组技术，可一次性向目标质粒上一至五个不连续位点同时引入定点突变的试剂盒。该试剂盒整合了2 × Phanta Flash Master Mix扩增模块和ClonExpress快速克隆模块。2 × Phanta Flash Master Mix具有高保真性及快速扩增的特点，且为一管式Mix，只需加入引物和模板即可进行扩增。使用Mut Express Universal定点突变试剂盒进行定点突变时，引物设计灵活、模板使用量极低，有利于原始甲基化模板的彻底降解。2 × CE Mix V3可以兼容1 - 5个位点的定向突变。如扩增产物特异，其Dpn I消化产物可不进行DNA纯化，直接用于重组反应，是DNA多点突变的优选试剂盒。
快速便捷：10 kb质粒定点突变仅需1.5 h，实验更加简单高效
高成功率：克隆数多，阳性率高，减少重复实验概率
1.快速便捷：10 kb质粒定点突变仅需1.5 h，实验更加简单高效
以10 kb质粒单点突变为例，仅需1.5 h，Vazyme #C216实验时间比前代基础版本节省1天时间。
图1. Vazyme #C216与前代基础版本操作时间比对
2. 高成功率：克隆数多，阳性率高，减少重复实验概率
测试单位点、双位点及五位点突变，Vazyme #C216克隆数均优于前代基础版本C214和C215。
图2. Vazyme #C216与前代基础版本克隆数比对
测试单位点、双位点及五位点突变，Vazyme #C216阳性率均优于前代基础版本C214和C215。
图3. Vazyme #C216阳性率情况
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。
Q1：质粒模板无法正常扩增？
A1：①引物设计有误：核对引物设计方案。推荐引物设计软件CE Design，选择相应模块进行设计。
②扩增体系配制错误：重复实验。
③扩增反应条件不适宜：调整扩增程序。
④模板质粒质量偏差：长期放置、反复冻融会导致模板质粒断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的质粒作为模板。
Q2：平板上未长出克隆或克隆数目很少
A2：①引物设计不正确：引物包含15 - 20 bp同源臂，GC含量40% - 60%。
②加入的DNA使用量不足/过量，或者比例不佳：尽量按照说明书中推荐的量和比例配制重组反应体系。
③重组环化反应体系中DNA不纯，抑制反应：未纯化DNA使用体积不应超过2 μl (反应体系体积的1/5)；建议将产物进行凝胶回收纯化，纯化产物溶解在ddH2O中。
④感受态细胞效率低：感受态细胞的转化效率需大于108cfu/μg。可进行简单检测，转化0.1 ng 质粒，取1/10进行涂板，生长1,000个菌斑，估算转化效率为108cfu/μg；重组产物的转化体积不应超过感受态细胞体积的1/10，否则会降低转化效率；选择克隆用感受态细胞(如 DH5α/Fast-T1)，不能选择表达感受态细胞。
Q3：定点突变未正确完成
A3：①引物设计错误：核对引物设计方案。
②扩增反应所用模板为非甲基化的质粒：Dpn I只能识别甲基化DNA，请务必使用从甲基化酶无缺陷的宿主菌中扩增的质粒作为PCR模板。
③扩增反应使用过多的模板质粒：对于大多数质粒，1 ng模板量已足以使扩增反应正常进行，过多的质粒模板将会导致Dpn I 消化不完全，降低突变成功率。
Q4：非目标位点突变
A4：①模板质粒携带未知位点突变：测序确认模板质粒序列正确性。
②扩增循环数过多：为了防止扩增过程中引入非目标突变，扩增循环数≤35。如果扩增效率良好的话，推荐扩增循环数应≤30。
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