Mouse Naive CD4+ T Cell Isolation Kit

价格

¥ 8800

货号 :

CS105-01

规格
- for 1×10^9 cells

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Vazyme Mouse Naive CD4⁺ T Cell Isolation Kit
诺唯赞小鼠Naive CD4⁺ T细胞分选试剂盒

磁分细选，纯净无杂

产品应用

小鼠脾脏/淋巴结 Naive CD4⁺ T细胞分离纯化

产品简介

Mouse Naive CD4⁺ T Cell Isolation Kit通过阴选方法从小鼠脾脏、淋巴结等组织单细胞悬液中分离出Naive CD4⁺T细胞。其原理是使用Biotin标记的单克隆抗体对非目的细胞进行标记，利用链霉亲和素磁珠去除非目的细胞，从而达到Naive CD4⁺ T细胞分选的目的。本产品18 min左右即可获得目的细胞，分选后细胞无异常激活，不影响下游实验。分离过程需搭配磁极或磁力架使用。

图1. Naive CD4⁺ T细胞分选操作流程

产品优势
纯度高：分选细胞的纯度可高达90% - 96%
活性好：阴性选择，磁珠不与细胞直接接触
速度快：无需分离柱，18 min即可获得目的细胞
无刺激：分选后细胞无异常激活，不影响下游实验

性能展示
1. 分选纯度高

图2. 小鼠脾脏分选前后的Naive CD4⁺ T细胞纯度

使用 Vazyme 细胞分选试剂盒进行阴性选择获得的Naive CD4⁺ T目的细胞有较高的纯度（图2）。

2. 细胞活性高，样本兼容广

图3. 分选后Naive CD4⁺ T细胞活性检测（a）、得率检测（b）以及纯度检测（c）

不同样本分选结果表明：小鼠Naive CD4⁺ T细胞分选试剂盒（Vazyme #CS105）可以兼容淋巴结、脾脏及其混合样本中 Naive CD4⁺ T细胞的分选，分选后 Naive CD4⁺ T细胞活性可达到90% - 96%（图3a）、得率良好（图3b），纯度90% - 96%（图3c）。

组分&说明

保存条件

2 ~ 8℃保存，冰袋运输。不可冷冻。

Mouse Naive CD8+ T Cell Isolation Kit

EasyIso Magnet

Q1：分选纯度低
A1：
（1）死细胞过多。制备单细胞悬液时，应尽量轻轻研磨样本，避免细胞破损。可用台盼蓝染色判断细胞状态；
（2）流式检测通道存在问题，根据染色抗体对应的激发和发射波长选择相应的流式检测通道；
（3）初始细胞量或细胞浓度过高/低。本产品分选细胞数量为1 × 10⁷ - 2 × 10⁸ cells，进行分选前应使用细胞计数仪或流式细胞仪进行细胞数目测定。试验中细胞浓度应调整为（1 × 10⁸cells）/ml；
（4）产品组分未充分混匀。Isolation Cocktail 和 Streptavidin Beads添加后应充分吸打混匀，其中Streptavidin Beads组分容易沉降，可以每1 - 2 min应吸打混匀1次；
（5）抗体的使用量或孵育时间不足。应按照说明书推荐抗体使用量和时间进行冰上孵育；
（6）染色异常。建议使用说明书推荐的抗体染色，避光条件下，冰上孵育20 - 30 min或室温15 min。

Q2：分选得率低
A2：
（1）计算方式不恰当。得率=（分选后细胞数×分选后目的细胞纯度）/（分选前细胞数×分选前目的细胞纯度）；
（2）Streptavidin Beads孵育时间过长。建议按照说明书推荐时间进行孵育。 Streptavidin Beads孵育时间过长可能会导致非特异性吸附；
（3）分选体积不恰当。按照分选建议的上样量，建议细胞浓度为1 × 10⁸ cells/ml；
（4）细胞悬液含有细胞团块。磁珠分选之前应该过滤去除细胞团块；
（5）抗体或磁珠用量超过说明书建议用量。按照说明书推荐的抗体/磁珠用量进行分选。
（6）分选时间过长，造成死细胞过多。尽量在冰上操作，避免操作时间过长，分选buffer中需加入EDTA或者DNA酶来避免细胞的黏连；

Q3：分选活性低
A3：
（1）样本制备研磨过于剧烈。制备单细胞悬液时，使用针管的针栓横截面进行研磨，应尽量轻轻研磨样本，避免细胞破损，分选前可以使用台盼蓝染色，确定细胞活性；
（2）分选过程造成机械损伤。分选过程应尽量保持动作轻柔，避免造成过大的机械损伤；
（3）分选时间过长。制备单细胞悬液后，尽快进行细胞分选，时间越长，细胞死亡越多；
（4）分选温度过高。分选细胞收集后需贮藏在适当温度下，一般是保存在4℃或者冰上；
（5）细胞裂红体积过大或者时间过长。该试剂盒中含有标记红细胞的抗体，无需再进行红细胞裂解。

Q4：分选结果存在高背景或非特异染色
A4：
（1）荧光染料孵育时间过长。荧光染料孵育时间可参照说明书推荐的使用时间；
（2）分选buffer成分影响目的抗原。需检查分选buffer成分；
（3）含细胞粘连体或死细胞。在进行活细胞表面染色时，使用活细胞鉴定染料对死细胞设门；使用时确保细胞样本新鲜，细胞尽量都放在冰上操作；
（4）分选buffer不新鲜。使用的分选buffer，请确认分选buffer新鲜并且已经正确制备；

Q5：分选结果无染色或弱染色
A5：
（1）细胞群的设门不正确。对细胞群进行正确的设门；
（2）荧光染料淬灭。荧光抗体及荧光抗体染色后的样本需注意避光保存；
（3）荧光抗体过期或未按照正确温度条件贮藏。需确认抗体储存温度，保质期；
（4）染色细胞数量过多。可以调整细胞群至推荐的密度，如5 × 10⁵ cells添加0.5 μl检测抗体，避光条件下，冰上孵育30 min或室温15 min。
（5）流式检测通道存在问题，根据染色抗体对应的激发和发射波长选择相应的流式检测通道；

Q6：分选后的 naive T 细胞表型如何确认？下游有哪些细胞应用
A6：
通过流式细胞术检测 CD4⁺/CD8⁺ CD62L⁺ CD44^-以验证纯度；
naive CD4⁺ T 细胞：可用于 Th1/Th2/Th17 极化实验、Treg 诱导等;
naive CD8⁺ T 细胞：适用于 CTL 分化、肿瘤免疫研究等。

Mouse Naive CD8+ T Cell Isolation Kit

EasyIso Magnet

CS105 说明书 -Mouse Naive CD4+ T Cell Isolation Kit - V25.1

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Mouse Naive CD8+ T Cell Isolation Kit

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