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上新 | 10 min超快速甲基化转化试剂，助力肿瘤早筛提质提速！
发布时间：
2024-07-31 17:09
DNA甲基化（DNA methylation）是哺乳动物中研究最为深入，也是当前商业应用最为成熟的表观遗传修饰之一，在肿瘤筛查、辅助诊断、伴随诊断及复发监测中有越来越多的应用。
成也BS 败也BS
无论是进行甲基化qPCR检测或甲基化测序，第一步就是进行甲基化转化。其中，亚硫酸氢盐转化因其转化率高、操作简单、成本低成为甲基化转化的“金标准”。但亚硫酸氢盐转化商业化应用中，也有转化时间较长、BS溶液不稳定、造成DNA损伤大等问题。
亚硫酸氢盐将C转化成U的过程主要有三个步骤：胞嘧啶与BS结合形成C-BS；C-BS水解脱氨成U-BS；U-BS在碱性条件下脱硫生成U。其中，第二步从C-BS水解脱氨变成U-BS被认为是整个亚硫酸氢盐反应的限速步骤。并且C-to-U的充分转化往往需要长时间的反应，这会导致DNA片段化。诺唯赞超快速亚硫酸氢盐转化试剂EM112、EM113对反应体系离子浓度、反应温度的系统性优化，使得转化率≥99.5%的基础上，极大缩短反应时间。
图1. 亚硫酸氢盐甲基化转化原理
一. 产品介绍
诺唯赞10 min超快速亚硫酸氢盐转化试剂（柱式：Vazyme #EM112 ；磁珠法：Vazyme #EM113) ，无需粉末配制，转化试剂全预混，转化时间仅需10 min，未甲基化的胞嘧啶转化效率≥99.5%。Vazyme #EM112、Vazyme #EM113投入量范围均为1 ng - 2 μg，转化后的产物适用于PCR扩增、qPCR检测、内切酶消化和NGS建库测序等下游应用。
二. 数据展示
以不同投入量293细胞 gDNA为模板，掺入1% Unmethylated Lambda DNA，Vazyme #EM112、Vazyme #EM113的转化率均高于Supplier A、Supplier B。
图2. EM112不同投入量下转化率 图3. EM113不同投入量下转化率
以不同投入量的人血gDNA、cfDNA为模板，掺入1% Unmethylated Lambda DNA。Vazyme #EM112、Vazyme #EM113的转化率均高于Supplier A、Supplier B。
图4. EM112不同样本类型转化率 图5. EM113不同样本类型转化率
使用真实样本实验中，往往会出现cfDNA提取浓度较低、提取时洗脱体积大于转化说明书投入量20 μl的情况。针对以上情况，我们测试了在不改变原有体系情况下，将样本投入体积增加至50 μl。模板体积由20 μl增大至50 μl后，qPCR检测的CT值小、回收率高，转化率仍可达到99.5%，可以满足下游检测需求。
图6. 大体积样本转化后回收率
图7. 大体积样本转化率
Vazyme #EM113可适配诺唯赞自动化核酸提取仪(Vazyme VNP-32P、VNP-96P)或其他品牌自动化仪，且自动化测试回收率不低于手动测试。
图8. 磁珠法甲基化转化试剂手动与自动回收率
订购信息
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产品类别 |
产品名称 |
货号 |
规格 |
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甲基化转化 |
EpiArt Ultrafast DNA Methylation Bisulfite Kit 超快速亚硫酸氢盐转化试剂（柱式） |
EM112-01/02 |
50 rxns/200 rxns |
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EpiArt Ultrafast Magnetic DNA Methylation Bisulfite Kit 超快速亚硫酸氢盐转化试剂（磁珠法） |
EM113-01/02 |
50 rxns/200 rxns |
