Plant Direct PCR Kit
快速、高效的植物直扩试剂盒
植物直扩PCR；高通量筛选
· 强耐受DNA聚合酶：经过定向进化改造的直扩DNA 聚合酶，对植物中的PCR 抑制物具有较强的耐受性，同时保持了较高的扩增性能。
· 宽广的样本兼容性：适合各种常见植物叶片及种子粗品的扩增。
· 高的稳定性：反复冻融50 次活性未见明显降低。
· 操作便捷：无需繁琐的DNA 提取步骤，使用少量叶片或简单裂解，即可进行PCR，节约大量时间。
以研磨法所得烟草叶片粗品、拟南芥叶片粗品、小麦叶片粗品、水稻叶片粗品及玉米种子粗品为模板，同时以CTAB法提取的上述五种植物基因组DNA为对照，使用2 × Plant Direct Master Mix分别扩增长度为0.5 kb、2.0 kb、0.3 kb、1.5 kb、2.3 kb、0.8 kb、0.3 kb的7个不同目的片段，均可成功扩增。可见2 × Plant Direct Master Mix 宽广的样本兼容性及较强的抑制剂耐受性。
本产品是经过定向进化改造的直扩DNA聚合酶，适用于对植物叶片、种子等进行直接扩增，可用于非多糖、多酚类植物样品高通量筛选。对植物中的PCR抑制物具有较强的耐受性，同时保持了高的扩增性能，可扩增5 kb以内DNA片段，试剂盒中的独特裂解缓冲液A可用于裂解新鲜或冻存的植物组织，操作简单，所得裂解物无需纯化即可作为扩增模板。裂解液中加入的保护剂使得粗品多次冻融后仍可有效扩增。预先配置的2 × Plant Direct Master Mix只需加入引物和模板即可进行扩增反应，减少了移液操作，提高了检测通量和结果的重现性。扩增产物为平末端，适用于ClonExpress和TOPO快速克隆试剂盒（C112/C113/C115/C601）。
2 × Plant Direct Master Mix 置于-20℃保存；
Plant Direct Lysis Buffer 可置于-20℃或2-8℃保存
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Q1：使用植物叶片作为样本时如何处理样品？
A1：推荐使用50μl反应体系并使用直径大小为0.5-3mm的幼嫩叶片。较小反应体系和过多的叶片使用量容易导致扩增失败。
Q2：使用植物粗品作为样本时如何处理样品？
A2：可通过调整粗品处理方式和使用量来获得更优扩增效果。可尝试将Plant Direct Lysis Buffer A中的样本捣碎后于室温孵育3min；将加入的模板在0.5-5μl之间调整，或将粗品按1:1-1:10的比例进行稀释后，取1μl作为模板；需注意的是，植物样本和粗品中存在PCR反应抑制成分，加入过多模板容易一致反应导致扩增失败。对于难以扩增的样本，可尝试在Plant Direct Lysis Buffer A中加入终浓度为2%的β-巯基乙醇或10mM的DTT。
Q3：无产物或产物量少。
A3：(1) 核对引物设计，确认引物的纯度和浓度。
(2) 重复实验，确认反应体系配制、反应程序设置无误。
(3) 增加循环数，或延长延伸时间。
(4) 提高Mg2+ 浓度。
(5) 设置退火温度梯度，找到合适的退火温度。
(6) 尝试不同的模板用量，增大反应体积或尝试使用BME/DTT。
Q4：有杂带或弥散条带。
A4：(1) 优化引物设计，降低引物浓度。
(2) 尝试提高退火温度或设置退火温度梯度，减少退火时间。
(3) 减少总循环数，延长时间不超过60sec/kb。
(4) 尝试不同的模板用量，增大反应体积或尝试使用BME/DTT。
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