Vazyme Anti-GFP Magnetic Beads
诺唯赞 GFP标签抗体磁珠
富集快+背景低，科研省心组合拳！
产品应用
IP/CoIP
产品简介
Anti-GFP Magnetic Beads是由小鼠来源的GFP标签高亲和力单克隆抗体与粒径为2.8 μm的聚合物磁珠共价偶联而成。本产品通过免疫沉淀(IP)的方式可便捷、快速、灵敏地从哺乳动物、植物、细菌等多种生物的细胞提取物中富集出N端或C端带有GFP标签的融合蛋白，用于后续的蛋白检测和分析。
产品优势
1. 低背景干扰
2. 高效富集
3. 样本兼容广泛
性能展示
1、低背景干扰
使用Anti-GFP磁珠Vazyme #PB106，以0.5 mg 293T细胞裂解蛋白为样本，对融合标签蛋白GFP-CK1和HA-CRY(存在间接互作[1]）进行免疫共沉淀实验，经1 × SDS-PAGE Sample Loading Buffer高温变性洗脱后，通过Western Blot检测蛋白富集水平。结果显示，PB106在无GFP-CK1表达时，对HA-CRY的非特异吸附低，背景更干净，CoIP结果可信度高。
图1. CoIP的Western Blot检测结果图
1. An, Y., Yuan, B., Xie, P. et al. Decoupling PER phosphorylation, stability and rhythmic expression from circadian clock function by abolishing PER-CK1 interaction. Nat Commun 13, 3991 (2022).
2、高效富集
使用Anti-GFP磁珠Vazyme #PB106，以0.5 mg 293T细胞裂解蛋白为样本，对融合GFP标签的蛋白进行免疫沉淀实验，经1 × SDS-PAGE Sample Loading Buffer高温变性洗脱后，通过Western Blot检测蛋白富集水平。结果显示，PB106对标签蛋白的富集能力高。
图2. N端GFP融合蛋白的Western blot检测结果图
3、样本兼容广泛
使用Anti-GFP磁珠Vazyme #PB106，以293T细胞、植物组织、大肠杆菌细胞裂解蛋白为样本，对各GFP标签融合蛋白进行免疫沉淀实验，经1 × SDS-PAGE Sample Loading Buffer高温变性洗脱后，通过Western Blot检测蛋白富集水平。结果显示，PB106兼容哺乳动物、细菌、植物样本来源的免疫沉淀实验。
图3. GFP融合蛋白的Western blot检测结果图
组分&说明
储存条件
2 ~ 8℃保存，冰袋运输。
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Q1：没有观察到富集的目的蛋白条带或者条带弱？
A1：（1）Input组有条带，说明目的蛋白成功表达
- 样品中存在干扰物质，如DTT、β-巯基乙醇等还原剂，以及SDS等表面活性剂浓度过高。
- 磁珠量少：IP时可适当增加磁珠用量至50 μl。
- IP时间不足：可适当增加磁珠孵育时间或4℃过夜孵育。
- 样本量不足：建议投入总蛋白至2 mg左右。
- 洗涤过程中避免过于剧烈，减少洗涤次数或使用更温和的洗涤缓冲液。
（2）Input组无条带，则需考虑是样本问题，蛋白丰度低或降解，需重新制备样本。
Q2：IP背景高或出现非特异性条带的原因及解决方案？
A2：（1）磁珠或管材上粘附了非特异蛋白：
- 细胞裂解液离心后取上清，去除不溶物。
- 使用低吸附管材，或者在最后一次洗涤前更换新的EP管，进行磁吸去液和洗脱。
（2）洗涤强度不够：增加洗涤的强度和次数或者适当增加洗涤液中表面活性剂浓度。
（3）磁珠用量过多：满足富集能力的情况下，适当降低磁珠用量。
Q3：磁吸速度慢
A3：（1）检查磁力架磁力是否减弱，若磁力架磁力减弱，请更换磁力架进行操作；
（2）若磁力架磁力正常，减少单次实验体积。
Q4：酸性洗脱，洗脱后蛋白少
A4：酸洗脱时可减少洗脱液体积，连续洗脱2到3次，最后合并洗脱上清；如果对洗脱效率的要求比较高，可对酸性洗脱液的pH在2.0 - 3.0之间进行一定的调整，相应的中和液的pH值或量也要进行一定的调整。
Q5：轻重链背景严重
A5：（1）WB使用的一抗，选择兔或其他非小鼠来源的抗体(与PB106磁珠上的Anti-GFP抗体的种属为不同来源)
（2）使用构象特异性二抗(推荐Vazyme #RA1009/RA1008)。
Q6：磁珠粘壁
A6：（1）建议使用吸附性低的耗材进行实验。
（2）在缓冲液中添加0.01% - 0.1% (V/V)的非离子型去垢剂(如Tween-20等)可以有效降低耗材对磁珠的粘附。
Q7：磁珠干在管盖
A7：存放时注意避免管身大幅度倾斜，如遇到磁珠干在管盖的情况，及时涡旋混匀，以免影响磁珠浓度。
Q8：样本量/蛋白投入量范围推荐
A8：总蛋白量推荐投入0.5 - 1 mg，如目的蛋白表达量低，可根据实际情况增加总蛋白投入量。
Q9：植物样本处理推荐
A9：将液氮速冻的组织块少量多次地加入预冷的研钵中，并不断补充少量液氮以维持低温状态。用研杵以画圈和捣碎结合的方式进行研磨得到精细的粉末。根据实验需求配制裂解缓冲液(也可使用Vazyme #PB201试剂盒中的Lysis/Wash buffer)，加入蛋白酶抑制剂后，按比例将预冷的裂解液加入存有植物粉末的离心管中(通常为1 g组织粉末加入2 - 4 ml裂解液)，置于4℃进行充分裂解，随后通过离心获得澄清的蛋白上清液。
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