Vazyme Human CD3+ T Cell Isolation Kit
诺唯赞 人CD3+ T细胞分选试剂盒
磁分细选，纯净无杂
产品应用
人PBMC CD3+ T细胞分离纯化
产品简介
Human CD3+ T Cell Isolation Kit通过阴选方法从人外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMC)中分离出CD3+ T细胞。其原理是使用Biotin标记的单克隆抗体对非目的细胞进行标记，利用链霉亲和素磁珠去除非目的细胞，从而达到CD3+ T细胞分选的目的。本产品18 min左右即可获得目的细胞，分选后细胞无异常激活，不影响下游实验。分离过程需搭配磁极或磁力架(场强不低于7,000 Gs)使用。
图1.人PBMC CD3+ T细胞分选操作流程
产品优势
纯度高：分选细胞的纯度可高达90% - 99%
活性好：阴性选择，磁珠不与细胞直接接触
速度快：无需分离柱，18 min即可获得目的细胞
无刺激：分选后细胞无异常激活，不影响下游实验
性能展示
1.分选纯度高
使用Vazyme细胞分选试剂盒进行阴性选择获得的CD3+ T目的细胞有较高的纯度（见图2）。
图2.人PBMC分选前后的CD3+ T细胞纯度
2.分选后纯度、得率、活性高
分选后纯度、得率、活性检测结果表明：人CD3+ T细胞分选试剂盒(Vazyme#HS101)的分选纯度可达到90% -99%、得率>30%、活性>90%，得率显著高于Supplier C，纯度、活性与Supplier C基本相当。
图3. 分选后人CD3+ T细胞纯度、得率、活性检测结果
3. 分选后激活效率高
分选后激活培养24h后，结果表明：人CD3+ T细胞分选试剂盒(Vazyme#HS101)分选后的T细胞，激活效率与Supplier C相当。
图 4. 分选后人CD3+ T细胞培养24h激活检测
4. 分选后增殖效果好
CCK-8增殖结果表明：人CD3+ T细胞分选试剂盒(Vazyme#HS101)的分选后的T细胞，与Supplier C的增殖效率相当。
图5.分选后人CD3+ T细胞增殖检测
5. 慢病毒感染效率高
慢病毒感染效率结果表明，人CD3+ T细胞分选试剂盒(Vazyme#HS101)的分选后的T细胞，与Supplier C的分选获得的CD3+ T细胞，慢病毒感染效率一致。
图6.分选后人CD3+ T细胞慢病毒感染效率的对比结果
组分&说明
保存条件
2 ~ 8℃保存，冰袋运输。
Q1：分选纯度低
A1：
（1）死细胞过多。制备单细胞悬液时应通过40 μm的细胞筛网，去除部分黏连的死细胞；若使用的复苏样本有明显黏连，推荐使用20 - 50 μg/ml DNase I室温孵育15 min；
（2）流式检测通道存在问题，根据染色抗体对应的激发和发射波长选择相应的流式检测通道；
（3）产品组分未充分混匀。Isolation Cocktail 和 Streptavidin Beads添加后应充分吸打混匀，其中Streptavidin Beads组分容易沉降，可以每1 - 2 min应吸打混匀1次；
（4）抗体的使用量或孵育时间不足。应按照说明书推荐抗体使用量和时间进行冰上孵育；
（5）染色异常。建议使用流式抗体说明书的推荐量进行抗体染色，避光条件下，冰上孵育20 - 30 min或室温15 min；
（6）磁架场强不足。建议使用配套的单孔或多孔强力磁极（磁场强度>7,000 Gs），IP实验等所用的磁力架存在场强不足的风险；
Q2：分选得率低
A2：
（1）计算方式不恰当。得率=（分选后细胞数×分选后目的细胞纯度）/（分选前细胞数×分选前目的细胞纯度）；
（2）Streptavidin Beads孵育时间过长。建议按照说明书推荐时间进行孵育。Streptavidin Beads孵育时间过长可能会导致非特异性吸附；
（3）分选体积不恰当。按照分选建议的上样量，建议细胞浓度为1 × 108 cells/ml；
（4）细胞悬液含有细胞团块。磁珠分选之前应该过滤去除细胞团块；
（5）抗体或磁珠用量超过说明书建议用量。按照说明书推荐的抗体/磁珠用量进行分选。
（6）分选时间过长，造成死细胞过多。尽量在冰上操作，避免操作时间过长，分选buffer中需加入EDTA或者DNA酶来避免细胞的黏连；
Q3：分选活性低
A3：
（1）分选过程造成机械损伤。分选过程应尽量保持动作轻柔，避免造成过大的机械损伤；
（2）分选时间过长。制备单细胞悬液后，尽快进行细胞分选，时间越长，细胞死亡越多；
（3）分选温度过高。分选细胞收集后需贮藏在适当温度下，一般是保存在4℃或者冰上；
（4）PBMC样本制备时，Ficoll液在密度梯度离心时温度异常，或复苏PBMC时未能及时去除DMSO，导致分选前样本活性低；
Q4：分选结果存在高背景或非特异染色
A4：
（1）荧光染料孵育时间过长。荧光染料孵育时间可参照说明书推荐的使用时间；
（2）分选buffer成分影响目的抗原。需检查分选buffer成分；
（3）含细胞粘连体或死细胞。在进行活细胞表面染色时，使用活细胞鉴定染料对死细胞设门；使用时确保细胞样本新鲜，细胞尽量都放在冰上操作；
（4）分选buffer不新鲜。使用的分选buffer，请确认分选buffer新鲜并且已经正确制备；
（5）人PBMC样本在进行染色时，应先使用FcR封闭剂阻断非特异性信号，同时注意尽量避免选择花青素染料或者使用专用的单核细胞封闭剂（花青素染料会非特异性结合单核细胞）；
Q5：分选结果无染色或弱染色
A5：
（1）细胞群的设门不正确。对细胞群进行正确的设门；
（2）荧光染料淬灭。荧光抗体及荧光抗体染色后的样本需注意避光保存；
（3）荧光抗体过期或未按照正确温度条件贮藏。需确认抗体储存温度，保质期；
（4）染色细胞数量过多。可以调整细胞群至推荐的密度，如5 × 105 cells添加0.5 μl检测抗体，避光条件下，冰上孵育30 min或室温15 min。
（5）流式检测通道存在问题，根据染色抗体对应的激发和发射波长选择相应的流式检测通道；
Q6：分选后的T细胞下游有哪些细胞应用
A6：
（1）T细胞激活与增殖实验，研究其活化信号通路、增殖动力学；
（2）适用于细胞毒性与肿瘤免疫实验等；
（3）细胞因子分泌与功能谱分析；
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